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科普知识
详解酶底物法检测水中粪大肠菌群检测实验步骤
添加时间:2022-12-27
    酶底物法检测大肠菌群是近年来新兴的一种方法,其相较于传统的多管发酵法、滤膜法等操作更加简单、检测快捷有效。目前该方法也是全球都在广泛使用的方法,在2018年该方法也被纳入国标。今天,我们就和大家一起来说说酶底物法检测大肠菌群的具体步骤,希望对大家有所帮助。

  一、酶底物法检测大肠菌群操作方法
 
  1、工作原理
 
  酶底物法检测大肠菌群是在特定温度下培养特定的时间,粪大肠菌群能产生酶底物法采用大肠菌群能产生β-半乳糖苷酶(β-D-galactosidase)的细菌群组,其能分解色原底物释放出色原体,使培养基呈颜色变化,以此来检测水中的大肠菌群。
 
  2、实验室用水
 
  实验室用水为无菌水,取来适量的纯净水,放在烧杯中,经过121摄氏度,高压蒸汽灭菌,需要20分钟。
 
  3、采样瓶的清洗准备
 
  (1)是新购买的500ml具旋帽或者是磨口塞得广口玻璃瓶,应在百分之二的盐酸中浸泡几个小时,还需要用自来水冲洗干净,再用纯净水清洗1-2次,控干,备用。
 
  (2)将清洗干净干燥的采样器,用专用的纸包裹起来,放入恒温干燥箱内,将温度设置到121摄氏度,灭菌20分钟,烘干。灭菌完成后,还需要关闭实验室电源待温度降到50摄氏度以下时,方可开门取样品瓶,不然,玻璃瓶会因为操作不当爆裂。
 
  4、仪器和试剂
 
  仪器:培养箱(36±1℃)、高压蒸汽灭菌器、定量盘(51孔和97孔)、程控定量封口机、试管、稀释瓶、移液管、量筒。
酶底物法检测仪器及其配置
  试剂:立科Colitech酶底物法检测试剂,灭菌稀释水。
 
  5、酶底物法检测操作步骤
 
  1)水样稀释
 
  检测实验所需水样为100ml,若水样污染严重可进行稀释(取10ml水样加入到90ml的灭菌稀释水中,必要时可加大稀释度)。本实验取20个水样分别进行总大肠菌群(1-10号)和粪大肠菌群(11-20号)的检测。
 
大肠菌群水样取样瓶


  2)定性试验
 
  用100ml的无菌稀释瓶量取100ml水样,加入专用培养基,摇晃至溶解,以36±1℃的温度在培养箱培养24小时。
 
  3)定量试验
 
  用100ml的无菌稀释瓶量取100ml水样,加入专用培养基,摇晃至溶解,将该溶液导入51孔(总大肠菌群)和97孔(粪大肠菌群)的定量盘内,然后将定量盘放入立科程控定量封口机封口,以36±1℃的温度在培养箱培养24小时。
 
  4、结果判定
 
检测结果对比
  1)定性反应
 
  对水样培养24小时后进行结果判定,如颜色变成黄色,则判定为阳性,表示水中含有大肠菌群,若水样未发生颜色变化,则判定为阴性,表示水样中不含大肠菌群。定性结果以大肠菌群检出或未检出作报告。
 
  2)定量反应
 
  对培养24小时后定量盘内的水样进行结果判定,若孔穴内的水样有黄色反应则表示该孔穴中含有大肠菌群,总大肠菌群对照51孔定量盘MPN表,粪大肠菌群对照97孔定量盘MPN表,结果以MPN/L报告。若所有孔穴均未产生黄色反应,以未检出作报告。
 

 
  以上就是关于酶底物法检测大肠菌群的方法及详细步骤。立科酶底物法检测仪器操作简便,数据准确,二次污染小,无需再无菌室内操作,满足GB5749-2006生活饮用水标准和GB8978-1996污水综合排放标准,适用于源水、瓶装水、饮用水、畜牧用水、废水、再生水、食品水、医疗用水等各类水样,目前已在国内广泛应用。
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